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液相色譜柱的使用和維護注意事項

色譜柱的正確使用和維護十分重要，稍有不慎就會降低柱效縮短使用壽命甚至損壞在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱

　　避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)

　　.應逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦?/span>

　　一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質否則反沖會迅速降低柱效

　　選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質被溶解

　　經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質在進行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml

　　下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序，作為參考：硅膠柱以正已烷(或庚烷)二氯甲烷和甲醇依次沖洗，然后再以相反順序依次沖洗，所有溶劑都必須嚴格脫水甲醇能洗去殘留的強極性雜質，已烷使硅膠表面重新活化反相柱以水甲醇乙腈一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗，再以相反順序依次沖洗如果下一步分析用的流動相不含緩沖液，那么可以省略zui后用水沖洗這一步一氯甲烷能洗去殘留的非極性雜質，在甲醇(乙腈)沖洗時重復注射100~200µl四氫呋喃數(shù)次有助于除去強疏水性雜質四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂有時也注射二甲亞砜數(shù)次此外，用乙腈丙酮和三fu醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質污染陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗，陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗，除去交換性能強的鹽，然后用水甲醇二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物)甲醇水依次沖洗

　　保存色譜柱時應將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至第二天或更長時間

　　色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內(nèi)，使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大在后兩種情況發(fā)生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內(nèi)填料整平然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內(nèi)相同)填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm)，可以起到保護延長柱壽命的作用采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的 通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上以硅膠為基質的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂?shù)奶盍仙闲碌纳V柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗含鹵族元素(fu氯溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應每隔4~5天開機沖洗15分鐘